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癌基因MDM2 过度表达与儿童急性淋巴细胞白血病的发病和预后的关系

发布时间:2014-01-16 09:02:10  

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?论著摘要?

癌基因MDM2过度表达与儿童急性淋巴细胞白血病的发病和预后的关系

蒋莎义 陈力军 高飞 李桂梅 刘廷亮 尹洪臣

  MDM2是抑癌基因p53的拮抗基因。p53基因突变发生于人类许多肿瘤,所以被认为与这些肿瘤的发生有关,而在白血病中p53基因突变则少见,却有P53蛋白功能的失活[1,2]。MDM2过度表达是p53基因突变以外的另一p53基因失活途径。我们用反转录聚合酶链反应(RT2PCR)方法检测了儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)治疗前外周血单个核细胞中MDM2mRNA表达情况,并分析MDM2过度表达与儿童ALL发病及预后的关系。

对象

1997年3月~1998年10月收治初发儿童ALL32例,其

结果

2根据Buteso2Ramos等[3]的判断方法,我们将MDM2与β

actin之比>20%定为过度表达。本组儿童急性淋巴细胞白

血病MDM2mRNA过度表达率为44%(14/32),患儿组MDM2

mRNA表达明显高于对照组(0/22),差异有显著性(P<0.01)。

对接受治疗的25例患儿随访半年以上,根据对化疗的反应及复发情况,将25例患儿进行分组。不良预后组6例:

2例于诱导缓解期死于颅内出血,2例用VDLP方案化疗4

周,骨髓呈部分缓解,2例诱导缓解后半年内复发;一般预后组19例,持续缓解半年以上。不良预后组MDM2mRNA过度表达率(5/6)与一般预后组(5/19)比较,差异有显著性(P=

0.0225)。

中男23例,女9例;年龄1.5~11岁,平均年龄6.6岁。初诊时外周血幼稚细胞在60%以上。每例治疗前抽取外周血

5ml,淋巴细胞提取液提取单个核细胞,置-80℃储存备用。

同时收集22例健康儿童外周血,提取单个核细胞作为对照。

方法

MDM2引物有意义链:5′2TTATTAAAGTCTGTTGGTGCA23′,

讨论

野生型P53蛋白有抑制细胞过度生长,诱导细胞凋亡的作用。MDM2编码蛋白P90能与P53蛋白结合,抑制其功能。目前认为MDM2过度表达是白血病发生的重要环节。高产量的MDM2蛋白抑制了P53蛋白对细胞过度生长的抑制作用,阻止P53蛋白介导的凋亡,在肿瘤的发生中起重要作用。在多数人类肉瘤中,MDM2高表达方式是基因扩增,而在白血病中MDM2基因扩增却不常见。我们的研究结果提示,在儿童ALL的发病中是MDM2mRNA过度表达而非DNA扩增。

研究表明,MDM2mRNA过度表达与儿童ALL的不良预后有关。随着白血病治疗方法的进展,目前70%~75%的儿童ALL已达长期无病生存。但仍有少数患儿对化疗不敏感和易复发,需要早期决定是否使用更有效的治疗手段,如骨髓移植。分子生物学方法在儿童ALL研究中的应用将使我们为临床估计ALL患儿预后、选择有效的治疗方案提供可靠依据。

β反意义链:5′2TGAAGGTTTCTCTTTCCTGAAG23′;2actin引物有意义链:5′2AAGGATTCCTATGTGGGC23′,反意义链:5′2

CATCTCTTGCTCGAAGTC23′。TRIZOL试剂提取单个核细胞内

总RNA。

βMDM2、2actincDNA的合成:取样本所提的RNA2μg,加

MDM2(或β2actin)反意义链引物,AMV逆转录酶等。反应体

系总量25μl,终浓度为dNTP0.5mmol/L,Mg+活AMV酶。

+

10mmol/L,

KCl50mmol/L,Tris50mmol/L,42℃水浴1h,95℃5min灭

βPCR扩增MDM2、2actincDNA:取上述逆转录产物5μl,加入MDM2(或β2actin)有意义链和反意链引物、Taq酶等,总反应体系50μl,终浓度dNTP200mmol/L,Mg+

+

200mmol/

L,KCl50mmol/L,Tris18mmol/L。扩增30个循环,每个循

环94℃30s变性,56℃30s退火,72℃60s延伸。

电泳及扫描分析:2%的琼脂糖凝胶,电泳上述PCR产物2h,紫外灯下摄像。岛津薄层光密度扫描仪分别测

MDM2和β2actin扩增产物电泳带强度的积分值,记录各样本

2

χ两者积分值之比。检验及四格表确切概率法对结果进行

统计学分析。

1SeligerB,PapadilerisS,VogelU,etal.Analysisofthep53and

MDM2geneinacutemyeloidleukemia.EurJHaematol,1996,57:2302240.

2MarksDI,KurzBE,LinkMP,etal.Highincidenceofpotentialp53inactivationinpooroutcomechildhoodacuteleukemiaatdiagnosis.Blood,1996,87:115521161.

3Bueso2RamosCE,YangY,DeleonE,etal.ThehumanMDM2oncogeneisoverexpressedinleukemias.Blood,1993,82:261722623.

(收稿日期:1999208202)

作者单位:250021济南,山东省立医院儿科

(

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