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微生物的培养和分离

发布时间:2013-11-28 12:01:17  

1.高压蒸汽灭菌的原理是使细菌蛋白质还是使DNA变性? 2.灭菌只消灭培养基和发酵设备上的杂菌吗?

3.下列选择性培养基能筛选出的微生物分别有哪些? 加入青霉素的培养基: 加入高浓度食盐的培养基: 不加氮源的无氮培养基: 不加含碳有机物的无碳培养基: 加入青霉素等抗生素的培养基: 加入氨基嘌呤和胸腺嘧啶核苷等的培养基:
4..配制细菌培养基的过程:

1.平板划线操作:

问题讨论:
1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前 都要灼烧接种环?在划线操作结束时,仍然需 要灼烧接种环吗?为什么? 操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环 上可能存在的微生物污染培养物;每次划线前灼 烧接种环是为了杀死上次划线结束后,接种环上 残留的菌种,使下一次划线时,接种环上的菌种 直接来源于上次划线的末端,从而通过划线次数 的增加,使每次划线时菌种的数目逐渐减少,以 便得到菌落。划线结束后灼烧接种环,能及时杀 死接种环上残留的菌种,避免细菌污染环境和感 染操作者。

2.在灼烧接种环之后,为什么要等其冷 却后再进行划线? 以免接种环温度太高,杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时,为 什么总是从上一次划线的末端开始划线?
划线后,线条末端细菌的数目比线条起始 处要少,每次从上一次划线的末端开始,能 使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减 少,最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。

梯度(系列)稀释操作:

2.涂布平板操作:

问题讨论:
涂布平板的所有操作都应在火焰附近 进行。结合平板划线与系列稀释的无菌 操作要求,想一想,第2步应如何进行无 菌操作?
应从操作的各个细节保证“无菌”。 例如,酒精灯与培养皿的距离要合适、 涂布器等不要接触任何其他物体、吸管 要在酒精灯火焰周围等等。

练习(多项选择)
1、下列细菌中,能利用含碳无机物作碳源的是 AC A 光合细菌 B 根瘤菌 C 硝化细菌 D 乳酸菌 2、培养大肠杆菌的培养基中,必需含有的碳源和氮源 AC 是 A 糖、有机酸等 B 二氧化碳、碳酸盐 C 蛋白质 D 无机氮化物 3、下列叙述不正确的是 BC A 培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质 B 液体培养基和固体培养基所含的最基本物质不相同 C 微生物在固体培养基上生长时,可以形成肉眼可见的 单个细菌

四、微生物的恒温培养

微生物的恒温培养

微生物的恒温培养

五、菌种的保存
1、临时保藏: 接种到固体斜面培 养基,菌落长成后 置于4℃冰箱保存。 2、长期保存: 甘油冷冻管藏法

问题讨论:
1.加琼脂的目的是什么? 作为凝固剂 2.消毒和灭菌有何不同?
消毒 条

件 温和 作用 物体表面或内部一 范围 部分,不包括芽孢和 孢子 灭菌 强烈 物体内外所有微生 物,包括芽孢和孢子

3.为什么消毒牛奶要用巴氏消毒法? 营养成分不被破坏

4.溶化时为什么要将牛肉膏连同称量纸一起加热? 可保证粘附在称量纸上的牛肉膏也能溶于水 中,减少误差 5.在灭菌前, 用牛皮纸、旧报纸包紧盛有 培养 基的锥形瓶的目的是什么? 在灭菌时能避免水蒸汽凝结时浸湿棉塞,在取 出培养基锥形瓶时也起到隔绝空气中杂菌污染 的作用 6.培养皿能否用高压蒸汽灭菌? 不能,因为培养皿要保持干燥,应该用干热灭菌.

练习:
1.获得纯净培养物的关键是 D A.将用于微生物培养的器皿.接种用具和培养基等 器 具进行灭菌 B.接种纯种细菌 C.适宜环境条件下培养 D.防止外来杂菌的入侵 C 2.下列操作与无菌技术无关的是 A.接种前用肥皂洗双手,再用酒精擦拭双手 B.接种前用火焰烧灼接种针 C.培养在50℃左右时搁置斜面 D.在酒精灯的火焰旁完成 3.外科手术器械和罐头食品的处理,要以能够杀死什 D 么为标准

4.关微生物营养物质的叙述中,正确的是 D A.是碳源的物质不可能同时是氮源 B.凡碳源都提供能量 C.除水以外的无机物只提供无机盐 D.无机氮源也能提供能量
解析:不同的微生物,所需营养物质有较大差别,要 针对微生物的具体情况分析。对于A、B选项,它的表达是 不完整的。有的碳源只能是碳源,如二氧化碳;有的碳源可 同时是氮源,如NH4HCO3;有的碳源同时是能源,如葡 萄糖;有的碳源同时是氮源,也是能源,如蛋白胨。对于C 选项,除水以外的无机物种类繁多,功能也多样。如二氧化 碳,可作为自养型微生物的碳源;NaHCO3,可作为自养 型微生物的碳源和无机盐;而NaCl则只能提供无机盐。对 于D选项,无机氮源提供能量的情况还是存在的,如NH3可 为硝化细菌提供能量和氮源。

5.下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是 A.防止杂菌污染 B.消灭杂菌 C.培养基和发酵设备都必须灭菌 D.灭菌必须在接种前

B

解析:灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A 说的是灭菌的目的,因为发酵所用的菌种大多是单一 的纯种,整个发酵过程不能混入其他微生物(杂菌), 所以是正确的;B是错误的,因为灭菌的目的是防止杂 菌污染,但实际操作中不可能只消灭杂菌,而是消灭 全部微生物。C是正确的,因为与发酵有关的所有设备 和物质都要灭菌;发酵所用的微生物是灭菌后专门接 种的,灭菌必须在接种前,如果接种后再灭菌就会把 所接菌种也杀死。

6.甲、乙、丙是三种微生物,下表Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ是用来培 养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在Ⅲ中正

常生 长繁殖;甲能在Ⅰ中正常生长繁殖,乙和丙都不能;乙

能在Ⅱ中正常生长繁殖,甲、丙都不能。下列说法正确
的是
H 2O MgSO4 粉状硫 K2HPO4 FeSO4 蔗糖 (NH4)2SO 10 g 4g 0.5 g 10 g 100 mL 9.25 g 40.4 g CaCl2 0.5 g

Ⅰ Ⅱ Ⅲ

+ + +

+ + +

+ + +

+ + + +

+ + +

+ + +

+ + +

C A.甲、乙、丙都是异养微生物 B.甲、乙都是自养微生物,丙是异养微生物 C.甲是固氮微生物,乙是自养微生物,丙是 异养微生物 D.甲是异养微生物,乙是固氮微生物,丙是 自养微生物 解析:Ⅰ培养基的特点是缺氮,能在这样的培养基 上存活的只能是固氮微生物;Ⅱ培养基的特点是没 有有机碳源,是培养自养微生物的培养基;Ⅲ培养 基是适宜异养微生物生长的培养基。

7.某学校打算开辟一块食用菌栽培基地,以丰富学生 的劳动技术课内容,首先对食用菌实验室进行清扫 和消毒处理,准备食用菌栽培所需的各种原料和用 具,然后从菌种站购来各种食用菌菌种.请回答以 下问题: (1)对买回来的菌进行扩大培养,首先制备试管培养基, 写出制备固体牛肉膏蛋白胨培养基所需的原 牛肉膏、蛋白胨、水、无机盐、琼脂 料 。 蛋白胨 其中提供氮源的主要 是 ;提供能源的主 牛肉膏 要物质是 ;琼脂的作用是 , 凝固剂 它不提供营养。 (2)微生物在生长过程中对各种成分所需量不同,故制 备培养基时各成分要有合适的 比例 ,在烧杯加 搅拌 入琼脂后要不停地 ,防 琼脂糊底引起烧杯破裂 止 .

(3)将配制好的培养基转移到锥形瓶中,加棉塞后包上牛 高压灭菌锅 皮纸并用皮筋勒紧放入 中灭菌, 121 ℃ 压力为 100KPa ,温度为 ,时 间 15---30min ,灭菌完毕拔掉电源,待锅内压 自然降至零后 力 ,将试管取出.

(4)使用高压蒸汽灭菌锅时注意,先向锅内倒入 适量水 , 把锅内水加热煮沸并将基中原有冷空气彻底排除后将 锅密闭。 (5) 从一支试管向另一支试管接种时注意,接种环要在 酒精灯 外 焰灭菌,并且待接种环 冷却 后沾 取菌种,试管口不能离开酒精灯火焰附近,将接种的试 4 管放入 ℃冰箱中保藏.

8.下表是某微生物培养基成分,请据此回答: (1)右表培养基可培养的微生物类型 自养型微生物 是 。 (2)若不慎将过量NaCl加入培养基中。 如不想浪费此培养基,可再加入 含碳有机物 .
编号 ① ② 成分 粉状硫 (NH4)2SO4 含量 10g 0.4g

③ ④ ⑤ ⑥ ⑦

K2HPO4 MgSO4 FeSO4 CaCl2 H2 O

4.0g 9.25g 0.5g 0.5g 100ml

(3)若除去成分②,加入(CH2O),该培养基可用于 固氮微生物 培养 。 (4)表中营养成分共有 3 类。 (5)不论何种培养基,在各种成分都溶化后分装前, 调整pH 要进行的是 。 (6)右表中各成分重量确

定的原则 依微生物的生长需要确定 是 。 (7)若右表培养基用于菌种鉴定,应该增加的成分 是 琼脂(或凝固剂) 。

9.分析有关微生物的资料,回答问题。 (1)1982年澳大利亚学者从胃活检组织中分离出幽门螺杆 拟核(核区) 菌。其遗传物质集中分布的区域称为_______。

(2)如图4支试管分别代表4种微生物在半固体培养基(琼 脂 含量3.5/L)中的生长状态,其中②号试管代表幽门螺 氧气浓度过高或过低 杆菌的生长状态,由图判断,该菌在 _________ 条件下不能生长。

(3)下表是某培养基的配方
成 葡萄 蒸馏 KH2PO4 MgSO4 NaCl CaSO4 CaCO3 琼脂 分 糖 水

含 10 g 量

0.2 g

0.2 g

0.2 g 0.2 g

5g

3.5 g 1 L

将幽门螺杆菌接种到pH适宜的该培养基中,置

于37℃下培养一段时间后,在该培养基中幽门螺杆
少 菌的数目比刚接种时________,主要原因是

缺少氮源(缺少氮源和生长因子) ______________________________。

(4)幽门螺杆菌形态如图所示,该菌在
人体中可引起胃溃疡等胃部疾病。

幽门螺杆菌生长的最适pH为6~7,
人体胃腔内pH在1~2之间,但胃黏膜的黏液层靠近

上皮细胞侧pH为7.4左右。若幽门螺杆菌随食物进入
胃腔,结合其结构特点以及能导致胃溃疡的特性,推

测该菌在胃内如何存活?_____________________。
幽门螺杆菌进入胃腔后,首先依靠鞭毛运动至pH较 高处缓冲,然后分泌蛋白中和胃酸,提高pH,以便 继续生存和繁殖。

【解析】 (1)幽门螺杆菌为原核生物,没有核膜 包围的细胞核,遗传物质集中在拟核内。 (2)幽门螺杆菌生活在半固体培养基的中部,说明 它不能生活在氧气浓度过高或过低的地方。 (3)培养基中缺乏氮源,幽门螺杆菌不能正常生活, 数量会减少。 (4)幽门螺杆菌进入胃腔后,可以先依靠鞭毛运动 至pH较高处缓冲,然后分泌蛋白中和胃酸,提高 pH ,以便继续生存和繁殖。


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