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免疫学检验问答题

发布时间:2014-01-12 09:02:05  

1、改良Neubauer计数板的结构 优质厚玻璃制成的改良牛鲍计数板被H形凹槽分为2个相同的计数池,计数池两侧各有一条盖片支持堤,比计数池高出0.1mm。将特制的专用盖玻片覆盖其上,形成高0.10mm的计数池。计数池为边长3.0mm的方格,平均分为9个大方格,每个大方格面积为1.0mm2,容积为0.1mm3(ul)。在9个大方格中,中央大方格用双线分成25个中方格,其中位于正中及四角的五个中方格是红细胞和血小板计数区域。每个中方格又用单线划分为16个小方格。位于四角的四个大方格是白细胞计数区域,用单线划分为16个中方格。

2、白细胞计数原理、操作及计算

原理血液经白细胞稀释液以一定的倍数稀释,同时破坏溶解成熟红细胞。将稀释的血液注入白细胞计数板,在显微镜下计数一定体积内的白细胞数,经换算即可求出每升血液中的白细胞数量

操作1、加稀释液 用吸管吸取白细胞稀释液0.38ml于小试管中。2、采血及稀释 用微量吸管吸取抗凝血或采取末梢血20ul,擦去管尖外部余血。将吸管插入小试管中白细胞稀释液的底部,轻轻放出血液,并吸取上层白细胞稀释液清洗吸管2~3次。3、混匀 将试管中的血液与稀释液混匀,待细胞悬液完全变为棕褐色。4、充池 再次将小试管中的细胞悬液混匀。用微量吸管吸取细胞悬液适量或玻璃棒蘸取细胞悬液1滴,注入改良Neubauer计数板的计数池中,室温下静置2~3分钟,待白细胞完全下沉后再做白细胞计数。5、计数 在低倍镜下计数四角4个大方格内的白细胞总数。6、计算 白细胞/L=N/4*10*20*10^6=N/20*10^9式中:N:表示4个大方格内数得得白细胞数 /4:每个大方格的白细胞平均数量 *4:将1个大方格白细胞数换算成1ul血液内白细胞数 *20:血液的稀释倍数 *10^6:1ul换算成1L

3、血小板计数原理、操作及计算

原理血液经稀释液按一定比例稀释和破坏红细胞后,混匀滴入血细胞计数板内,在显微镜下计数一定范围内的血小板数量,经过换算求出每升血液中血小板的数量。

操作1、取稀释液 准确吸取稀释液0.38ml,置于清洁小试管中。2、采血及稀释 常规末梢采血,让血液自然流出,擦去第1滴血,准确取血20ul,或取已备抗凝血20ul,置于稀释液中,立即充分混匀,3、充池 取混匀的血小板悬液1滴充入计数池内,静置10~15分钟,使血小板充分下沉。4、计数 用高倍镜计数中央大方格的四角和中央5个中方格内血小板数量。5、计算 血小板数/L=N*5*10*20*10^6=N*10^9/L 式中:N:表示5个中方格内数得的血小板数。*5将5个中方格血小板数换算成1个大方格血小板数。*10:将1个大方格血小板数换算成1ul血液内血小板数。*20血液的稀释倍数。*10^6:由1ul换算成1L

4、抗凝血的种类及应用

1、枸橼酸钠:1:9(V:V)的比例用于血栓与止血检验,1:4(V:V)的比例用于魏氏法血沉测定。2、乙二酸四醋酸盐:用于全血细胞分析,尤其适用于血小板计数3、肝素:用于血细胞比容测定和临床生化的多项检查,但不适合凝血功能和白细胞计数和分类计数检查4、草酸钠:用于血栓于止血检查

5、氰化高铁血红蛋白法测定血红蛋白的原理及注意事项

原理 血红蛋白中的亚铁离子被高铁氰化钾氧化成高铁离子,血红蛋白转化成高铁血红蛋白。高铁血红蛋白与氰根离子结合,生成稳定的氰化高铁血红蛋白。血红蛋白多在5分钟内完全转化为高铁血红蛋白。氰化高铁血红蛋白在波长540nm处的吸光度同它在溶液中的浓度成正比。

注意事项1、试剂应贮存在棕色硼硅有塞玻璃瓶中,不能贮存在塑料瓶中,否则会使CN-丢失,造成测定结果偏低;试剂应置于4~10℃保存,不能放0℃以下保存,因为结冰可引起试剂失效;试剂应保持新鲜,至少一个月配制一次;氰化钾是剧毒品,须妥善保存,配试剂时要严格按剧毒品管理程序操作。2、脂血症或标本中存在大量脂质可产生浑浊,可引起血

红蛋白假性升高。白细胞数>20*10^9/L、血小板计数>700*10^9/L及异常球蛋白增高也可出现浑浊,均可使血红蛋白假性升高;煤气中毒或大量吸烟引起血液内碳氧血红蛋白增多,也可使测定值增高。若因白细胞数过多引起的浑浊,可离心后取上清液比色;若因球蛋白异常增高引起的浑浊,可向比色液中加入少许固体氯化钠或碳酸钾,混匀后可使溶液澄清;标准曲线或K值应定期检查、校准。3、测定后的HiCN比色液不能与酸性溶液混合,因为氰化钾遇酸可产生剧毒的氢氰酸气体。为防止氰化钾污染环境,比色测定后的废液应集中于广口瓶中处理。4、HiCN参考液的纯度检查

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